เซลล์ ลิมโฟไซต์เป็นเซลล์เม็ดเลือดชนิดเดียว ที่การแพร่กระจายในเนื้อเยื่อส่วนปลายเป็นบรรทัดฐานทางสรีรวิทยา และเป็นขั้นตอนบังคับในการพัฒนาการตอบสนองของภูมิคุ้มกัน ดังนั้น การประเมินเชิงปริมาณของกิจกรรมการเพิ่มจำนวนของลิมโฟไซต์ ภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่วางแผนไว้สามารถทำหน้าที่ เป็นตัววัดปฏิกิริยาของลิมโฟไซต์ต่อสิ่งเร้าภายนอกอย่างใดอย่างหนึ่ง หากสิ่งเร้าภายนอกดังกล่าวเป็นแอนติเจนจำเพาะ

ระดับของการตอบสนองที่เพิ่มขึ้น ของลิมโฟไซต์ถือได้ว่าเป็นตัวบ่งชี้การสร้างภูมิคุ้มกัน ของสารเตรียมที่มีแอนติเจน ความสามารถในการกระตุ้นการตอบสนองของภูมิคุ้มกัน หรือจำนวนของโคลน s ที่ตอบสนองต่อแอนติเจนของลิมโฟไซต์นี้ มีสารที่เรียกว่าไมโทเจน สำหรับความสามารถในการทำให้เกิดการแบ่งตัวของเซลล์ ไมโตเจนทำให้เกิดการแพร่กระจายของโพลีโคลนอล หรือโอลิโกโคลนัลของลิมโฟไซต์ เลคตินไฟโตเฮแมกกลูตินิน PHA

จากถั่วทั่วไป ถั่วแขกเป็นไมโตเจนตัวแรกของลิมโฟไซต์ ที่ถูกค้นพบโดยบังเอิญในระหว่างการทำงานประจำในคลังเลือด เกี่ยวกับการสร้างเม็ดเลือดแดงในเม็ดเลือดแดง สามารถจับกลุ่มเม็ดเลือดแดงได้เพียงชนิดซีรั่มบางชนิดเท่านั้น PHA เป็นไมโทเจนที่แรง ซึ่งกระตุ้นการเปลี่ยนแปลงของเซลล์จากระยะ G2 เป็นไมโทซิส PHA ถูกแยกออกจากถั่วเป็นครั้งแรกโดย P. โนเวลล์ในปี 1960 ตั้งแต่นั้นมาวิธีการใหม่ในการประเมิน กิจกรรมการงอกขยาย

เซลล์ลิมโฟไซต์ของมนุษย์ และสัตว์ทดลองก็ปรากฏขึ้น เรียกว่าการเปลี่ยนแปลงรูปร่างเป็นเซลล์บล๊าส ปรากฎว่า PHA ทำให้เกิดการแบ่งเซลล์แบบไมโทซิสซึ่งส่วนใหญ่เป็นทีลิมโฟไซต์ นอกจากนี้ เลคตินคอนคานาวาลิน A ซึ่งแยกได้จากพืชในตระกูลตระกูลถั่วนั้น มีผลต่อการสร้างไมโทเจนิกที่สำคัญต่อทีลิมโฟไซต์ คานาวาเลีย เอนซิฟอร์ม เมื่อเร็วๆนี้โมโนโคลนัลแอนติบอดี mAbs ที่ต่อต้านแอนติเจน CD3 หรือ CD28 ในฐานะตัวกระตุ้นโพลีโคลนัลที่ทรงพลังที่สุด

ทีลิมโฟไซต์ได้กลายเป็นที่แพร่หลายมิโตเจน จากรากของพืชไฟโตลัคก้าอเมริกานา กระตุ้นการงอกของทั้งบีและทีลิมโฟไซต์ และยังทำให้เกิดการผลิตโพลีโคลนอล ของอิมมูโนโกลบูลินโดยบีลิมโฟไซต์ การแพร่กระจายของบีลิมโฟไซต์ ส่วนใหญ่ เกิดจากการเตรียมสารเอนโดทอกซินจากไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ LPS จากแบคทีเรียแกรมลบ วิธีการในการประเมินกิจกรรมการงอกขยายของเซลล์ลิมโฟไซต์ ในการเพาะเลี้ยงในหลอดทดลองได้รับการออกแบบมา

เพื่อตรวจจับและวัดกระบวนการที่มีลักษณะเฉพาะ สำหรับการแบ่งตัวของ”เซลล์” การทำสำเนาดีเอ็นเอในเฟส S ของไมโทซิสมีหลายวิธี ในอดีตวิธีแรกคือการใช้กล้องจุลทรรศน์ สัณฐานวิทยา เซลล์ที่ผ่านเฟส S แต่ยังไม่ผ่านไมโทซิสมี DNA และส่วนประกอบอื่นๆของโครโมโซมจำนวนสองเท่า ดังนั้น ทั้งเซลล์จึงมีขนาดใหญ่กว่าเซลล์ที่ไม่แบ่งตัว ซึ่งมองเห็นได้ชัดเจนในการเตรียมการสเมียร์ หรือแม้กระทั่งในวัฒนธรรมที่มีชีวิต ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

วิธีการด้วยกล้องจุลทรรศน์ สำหรับการตรวจหาเซลล์ในเฟส S เรียกว่าปฏิกิริยาการเปลี่ยนรูปแบบบลาสต์ และปัจจุบันใช้อย่างน้อยที่สุด เพื่อแสดงการระเบิดและรูปแบบอื่นๆของลิมโฟไซต์ นอกจากการกระตุ้นโพลีโคลนัลของทีและบีลิมโฟไซต์แล้ว วิธีการบนพื้นฐานของการกระตุ้น ของสำเนาพันธุ์ที่จำเพาะต่อแอนติเจน สารก่อภูมิแพ้ของทีและบีเศลล์ยังใช้กันอย่างแพร่หลาย โดยธรรมชาติในกรณีหลังจำนวนเซลล์ที่แปลงสภาพอาจมีน้อย

วิธีการทางสัณฐานวิทยาไม่เหมาะ สำหรับการคำนวณ ในพันธุศาสตร์ในห้องปฏิบัติการ ปฏิกิริยาของการเปลี่ยนแปลงแบบระเบิดของเซลล์ลิมโฟไซต์ถูกใช้ เพื่อแสดงภาพโครโมโซมและวิเคราะห์คาริโอไทป์ของมนุษย์ โคลชิซีนใช้เพื่อหยุดวัฏจักรของเซลล์ในระยะของไมโทซีส วิธีการสีขึ้นอยู่กับการใช้สีย้อมภายในเซลล์ที่รวมอยู่ในสาย DNA ตัวอย่างเช่น MTT ไดเมทิลไทอะซอล-2-yl-2,5-ไดฟีนิล เตตราโซเลียม โบรไมด์ วิธีไมโครไซโตฟลูออโรเมตริก FACS

ซึ่งมันขึ้นอยู่กับการใช้สีย้อมเรืองแสงที่รวมอยู่ในสาย DNA ซึ่งประเมินโดยโฟลว์ไซโตมิเตอร์ วิธีไอโซโทปรังสี มันขึ้นอยู่กับการใช้นิวคลีโอไทด์ที่ติดฉลาก ซึ่งรวมอยู่ใน DNA เท่านั้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งไทมิดีน β-อิมิตเตอร์,ยูริดีน 14 C-Td γ-อิมิตเตอร์หรือดีออกซียูริดีน-γ-อิมิตเตอร์ มาตรฐานทองคำสำหรับการประเมินการงอกขยายเป็นวิธีสุดท้าย ไอโซโทปรังสี เพราะมันไม่เพียงนับเฉพาะเซลล์ที่อยู่ในเฟส S เท่านั้น แต่ยังรวมถึงเซลล์ลูกที่แบ่งออกแล้ว

ซึ่งวิธีอื่นๆให้เราอธิบายสั้นๆถึงวิธีการประเมินการงอกขยายโดยการรวมตัวของ 3 H-ไทมิดีน สร้างระบบทดลองของการกระตุ้นเซลล์ลิมโฟไซต์ ในหลอดทดลอง อาจเป็นการแนะนำของแอนติเจน ไมโตเจน หรือสารกระตุ้นอื่นๆ ไซโตไคน์แอนติบอดีต้านแอนติเจนบนพื้นผิว เวลาในการเพาะเลี้ยงเซลล์ลิมโฟไซต์ขึ้นอยู่กับตัวกระตุ้น สำหรับไมโตเจนโดยปกติ 72 ชั่วโมง สำหรับแอนติเจนสูงสุด 6 ถึง 7 วัน 4 ถึง 24 ชั่วโมงก่อนหยุดการทดลองในหลอดทดลอง

ซึ่งใช้กันมากที่สุดคือเมทิล 3H-ไทมิดีนกัมมันตภาพรังสีจำเพาะของยาอยู่ที่ประมาณ 1-2 Cu/ไมโครโมล หากกิจกรรมเฉพาะของการเตรียมเชิงพาณิชย์สูงขึ้น ไทมิดีนที่เย็นกล่าวคือ ไม่มีกัมมันตภาพรังสี จะถูกเจือจางเป็นค่าที่กำหนดไว้ล่วงหน้า เพื่อหลีกเลี่ยงการตายของไทมิดีนของเซลล์ที่มีชีวิต เตรียมสารละลายไทมิดีนเมทริกซ์ในอาหารเลี้ยงเชื้อ โดยปกติความเข้มข้นของมันคือ 20 µCiu ต่อมิลลิลิตร

หากการทดลองดำเนินการในหลอดทดลองในหลุมที่มีปริมาตร 200 ไมโครโมล จากนั้นแต่ละหลุมจะเพิ่มสารละลายเมทริกซ์ H-ไทมิดีนจำนวน 3 ถึง 25 ไมโครลิตร ซึ่งจะสร้างความเข้มข้นในการทำงาน 0.5 μCi ต่อหลุม จำนวนเซลล์ในบ่อน้ำ เมื่อเสร็จสิ้นการเพาะปลูกต่อหน้า 3H-ไทมิดีน เซลล์จะถูกลบออกจากบ่อด้วยอุปกรณ์เก็บเกี่ยว ไปยังตัวกรองพรุนขนาดเล็กที่เซลล์ไม่สามารถผ่านได้ ซึ่งสอดคล้องกับรูปแบบของหลุมของแผ่นเพาะเลี้ยง

ตัวกรองจะถูกล้างเพื่อขจัด 3H-ไทมิดีนที่ ไม่ได้อยู่ใน DNA ของเซลล์แล้วทำให้แห้งที่อุณหภูมิ 60 ถึง 80 องศาเซลเซียส ภายใต้หลอดอินฟราเรดหรือเครื่องเป่าผม ตัวกรองแต่ละตัววางอยู่ในขวดโหลที่มีของเหลวที่เรืองแสงวาบ และจำนวนพัลส์ต่อนาที คำนวณในตัวนับอนุภาค β พิเศษและกำหนดดัชนีการกระตุ้น ค่าของมันคือตัวบ่งชี้เชิงปริมาณของระดับ การแพร่กระจายของเซลล์ที่ศึกษา ตัวชี้วัดการทดลอง หลุมทัลจะถูกเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม และคำนวณนัยสำคัญทางสถิติของความแตกต่าง

บทความอื่นที่น่าสนใจ  ➠ สายตาสั้น คำจำกัดความของโรคสายตา รูปแบบและสาเหตุ อธิบายได้ ดังนี้